1914年，军阀混战、列强环绕，昭陵双骏离奇失踪，在那个黑暗的年代，历史上最肮脏的夜晚，陕西昭陵李世民陵墓，六座马的雕刻，世称昭陵六骏，价值连城。血腥黑夜，其中两骏却离奇被盗。昭陵守陵人唐振华（田亮 饰）一路追踪到京城，偷运国宝的赶车人当街被杀，线索中断。是杀人灭口还是 另有隐情？各方神秘人物轮番登场，命案背后却隐藏着惊天阴谋......
幕后花絮：
颜丙燕、刘晓晔、黑妹、画家崔自默等曾先后出现在电影《国宝疑云》拍摄现场。
一热爱、二认真、三用心，踏实讲故事、诚信做电影是《国宝疑云》剧组秉承的原则。
电影因戏份复杂繁重，剧组在片中加入了大量撞车、骑马、受刑的戏份，除此之外，演员的服装也以长衫、西装为主，酷热天气加上繁重戏份，几位主演在片场直呼吃不消。
电影中融入了大量中华文化元素，像秦腔、北京评弹等。
因《万箭穿心》而横扫影后桂冠的颜丙燕饰演都督夫人。她表示因为剧本特别精彩，讲述的“国家情怀”也极为感人，所以当自己看完剧本后，没多想就直接接受了参演的邀请。
相声演员李菁饰演文物商人洪河肪，对于自己在片中的角色，李菁笑言有点“反派”的味道，非常有看点，他更透露这个角色颠覆了自己以往的表演形象。
李菁表示自己在片中“受虐”最多，因为自己在电影里的角色非常阴沉，内心戏很多，导演叫停的次数也最多，不过能演绎这样一个复杂的角色也特别过瘾。
影片根据民国第一盗宝悬案这一真实历史事件改编。
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